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閱讀次數(shù):943 發(fā)布時(shí)間:2014/5/19 10:53:22
在ELISA實(shí)驗(yàn)中的操作步驟里,其中有一項(xiàng)洗滌。整個(gè)實(shí)驗(yàn)看起來(lái)非常簡(jiǎn)單,但是在實(shí)際操作過程中,也不能掉以輕心,還是應(yīng)該仔細(xì)檢查洗滌步驟,才能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。
ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌次數(shù)法則總結(jié)方案:
洗滌次數(shù)越多,背景越低。太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度,使其難以測(cè)定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過,ELISA板的制造商會(huì)對(duì)洗滌次數(shù)提出建議。一般而言,制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對(duì)于用戶包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景(殘留量)和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會(huì)增加背景信號(hào)。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。
吸液高度會(huì)明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大,那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部,那么也會(huì)使吸液效率降低,殘留量增加。
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