血清：指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。
用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能存在的沉淀物有以下三種:
1.纖維蛋白：它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到1-2mm，肉眼可觀。因?yàn)檠宥际窃诘蜏叵逻M(jìn)行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的體）在處理過(guò)程中仍然處于溶解狀態(tài)，當(dāng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾分裝后，就會(huì)在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。
2.膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。
3.磷酸鈣：也是常見的一種沉淀物，通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁的現(xiàn)象，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。
影響：
1.血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過(guò)濾。一般說(shuō)來(lái)，在血清生產(chǎn)后已經(jīng)經(jīng)過(guò)100nm或者40nm的過(guò)濾處理，并經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的無(wú)菌檢測(cè)，因此不推薦再次過(guò)濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。可以在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過(guò)濾。
3、污染，磷酸鈣往往被誤認(rèn)為是微生物污染，研究者可能會(huì)在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，就會(huì)去做無(wú)菌試驗(yàn)，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會(huì)觀察到更多的絮狀沉淀，因此就斷定血清被污染了。我們建議不要直接將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進(jìn)行培養(yǎng)以觀察是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。另外，也可以進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認(rèn)是否有污染。
避免血清沉積發(fā)作的辦法：
a）凍結(jié)血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，削減沉積的發(fā)作。
b）血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)矩?fù)u晃均勻（當(dāng)心勿形成氣泡），使溫度與成分均一。
c）勿直接由-20℃直接至37℃凍結(jié)，因溫度改變太大，簡(jiǎn)單形成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)作沉積。
d）勿將血清置于37℃太久，不然血清會(huì)變得污濁，一起血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，然后影響血清的質(zhì)量。
e）血清的熱滅活十分簡(jiǎn)單形成沉積物的增多，若非必要，能夠無(wú)須做此過(guò)程。
f）若有必要做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的準(zhǔn)則，而且隨時(shí)搖晃均勻，溫度過(guò)高，時(shí)刻過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)形成沉積物的增多。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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