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點(diǎn)擊次數(shù):13294 發(fā)布時(shí)間:2012/7/4 16:26:54
英國的制藥企業(yè)葛蘭素史克公司(NYSE: GSK)完成收購Reliant藥業(yè)公司,收購價(jià)為16.5億美元
ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
操作步驟 | 可能原因 | 解決辦法 |
選擇試劑 | 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。 | |
加 樣 | 1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣; 2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。 | 1.標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2.加樣后及時(shí)放入孵箱。 3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 4.如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5.標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。 |
孵 育 | 1.孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗徹底; 2.孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底。 | 1.貼封片或加蓋; 2.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。 |
洗 板 | 1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2.采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。 3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 | 1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2.合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。 |
顯 色 | 1. 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑; 2. 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。 | 1. 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2. 加樣時(shí)保持顯色劑不外流; 3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 |
終 止 | 加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。 | 加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 |
讀 板 | 讀板時(shí)板底不清潔。 | 應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。 |
全過程 | 1.整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 2.實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。 |
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原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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