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ELISA試劑盒幾種常用檢測方法你都知道嗎?

點擊次數(shù):12982   發(fā)布時間:2017/2/14 10:49:58

   間接法是檢測抗體*常用的方法,其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:
    (1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
    (2)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,在洗滌過程中被洗去。
  (3)加酶標(biāo)抗抗體:與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合,從而使該抗體問接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體,可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。
  (4)加底物顯色:顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。
  本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。

Elisa間接法、競爭法、捕獲法,捕獲法測IgM抗體
  血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在,后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法,先將所有血清IgM(包括特異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再測定特異性IgM。操作步驟如下:
  (1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上,形成固相抗人IgM。洗滌。
  (2)加入稀釋的血清標(biāo)本:保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。
  (3)加入特異性抗原試劑:它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌。
  (4)加入針對特異性的酶標(biāo)抗體:使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合。洗滌。   
    (5)加底物顯色:如有顏色顯示,則表示血清標(biāo)本中的特異性IgM抗體存在,是為陽性反應(yīng)。              

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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