實(shí)驗(yàn)樣本的處理可謂是ELISA的關(guān)鍵步驟,上海恒遠(yuǎn)提供提供
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ELISA試劑盒樣本處理注意事項(xiàng):
一、均質(zhì)
①組織樣本:肉、肝食品類切細(xì),用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎,混合均勻。
②水產(chǎn)樣本:去除樣品的非食用部分,食用部分切細(xì),用均質(zhì)器均漿;原料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。
③蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻。
④水果、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。
二、振蕩提取
將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部,提取待測組分。
①振蕩方式:振蕩器上進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
②在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí),應(yīng)邊加邊振蕩,防止組織凝結(jié)成團(tuán),不利于提取。
三、乳化現(xiàn)象
在用有機(jī)溶劑提取過程中,如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,解決的方法有:
①用細(xì)頭輕輕的攪拌,破壞乳化后,再重復(fù)離心。
②再加入適量的提取劑,重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
四、濃縮
由于凈化過程中引入的溶劑,可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈,再用?fù)溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式:氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。
請注意:
①在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質(zhì)干擾。
②在吹樣本時(shí),針頭應(yīng)在液面上空,避免與樣本接觸,防止產(chǎn)生交叉污染。
③樣本吹干后應(yīng)立即取下,避免吹的時(shí)間過長,影響*終檢測結(jié)果。
④不同的藥物,吹干后樣本的保質(zhì)期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
五、凈化
經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原
抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程,我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的*常見的凈化是:液液分配法。
比如:用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷,在加入正己烷和復(fù)溶液渦動后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,可以60℃水浴加熱,至乳化現(xiàn)象消失或減弱后,加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。
原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司