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人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA試劑盒實驗操作步驟

點擊次數(shù)：13081 發(fā)布時間：2015/3/31 10:38:33

很多研究生在訂購elisa試劑盒的時候，會問到有關試劑盒的實驗步驟等問題，就在剛才，我司錢經(jīng)理接到鐘老師的來電，她說想咨詢下人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA試劑盒，不知道這試劑盒實驗步驟是怎樣操作的，能否發(fā)份說明書給我看下嗎，我司錢經(jīng)理把說明書發(fā)他看下。

2015/03/31 09:38:55對方已成功接收了您發(fā)送的離線文件“人葡萄球菌蛋白A（SPA）說明書.pdf”（148.91KB）。
下面是我司錢經(jīng)理為客戶整理的一份人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA試劑盒實驗操作步驟：

人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA試劑盒實驗材料與試劑配制：

1.儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。

人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA試劑盒操作步驟：

1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2）分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

3）標準品的稀釋：準備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標準品。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

4）加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復5 次，拍干。

7）加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。

8）溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙徹底拍干。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

11）終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內(nèi)，以免影響準確性。