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抗體和抗原間的結(jié)合率取決于親和常數(shù)。親和常數(shù)可受到溫度、pH和緩沖液成分的影響。改變?nèi)芤褐锌贵w和抗原的相對濃度也可控制抗體-抗原復(fù)合物形成的程度。由于通常無法改變抗原的濃度，因此必須針對每種應(yīng)用和每組實驗條件確定各抗體的*佳工作濃度（稀釋度）。

許多Abcam抗體在數(shù)據(jù)表都有列出不同實驗的推薦稀釋度。我們推薦嘗試用這些稀釋度開始實驗。但是，這些稀釋度可能需要進(jìn)行某些優(yōu)化。

【優(yōu)化抗體稀釋度：滴定實驗】

*佳滴度或稀釋度為在*少背景/非特異性結(jié)合的情況下得到*佳染色效果的濃度（稀釋度）。必須通過實驗確定每次測定的*佳抗體濃度。通常通過在滴定實驗中使用一系列稀釋度來確定。

當(dāng)實驗室收到一種新抗體時，建議嘗試用滴定實驗確定*佳抗體稀釋度以獲得*佳結(jié)果。

要進(jìn)行滴定實驗，首先要選擇固定的孵育時間。然后制備一系列實驗稀釋度的抗體以備測試。每種稀釋度應(yīng)針對相同類型的樣品進(jìn)行測試，以保持實驗條件標(biāo)準(zhǔn)化。

許多抗體批間性能差別不大，因此您只需要進(jìn)行一次滴定實驗。但是，多克隆抗血清抗體濃度在不同動物間或不同血清采集時間可能顯著不同。在這些情況下，或者當(dāng)您注意到任何抗體的批次間染色結(jié)果有變化時，我們推薦再次對該瓶抗體進(jìn)行滴定實驗以獲得*佳濃度。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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