隨著一場(chǎng)雨又迎來(lái)了一個(gè)新的工作日，可能剛起床那會(huì)還是睡眼惺忪，但是上班的時(shí)候可就要進(jìn)入工作狀態(tài)啦！相信當(dāng)聰明的您在看到本文章的標(biāo)題時(shí)就能夠知道，我們今天要為您談?wù)f的是關(guān)于轉(zhuǎn)化大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)。
恒遠(yuǎn)問(wèn)您：轉(zhuǎn)化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)的目的是哪三個(gè)方面呢？當(dāng)然，這可不止簡(jiǎn)單的一個(gè)問(wèn)題，既然我們問(wèn)出了，那么就有答案啦。如果您現(xiàn)在移動(dòng)右手中的鼠標(biāo)去搜索轉(zhuǎn)化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)的話一定會(huì)出現(xiàn)很多的相關(guān)資料，有朋友在購(gòu)買(mǎi)我公司的產(chǎn)品后提出了需要技術(shù)指導(dǎo)，那么我們今天就來(lái)仔細(xì)的看看本實(shí)驗(yàn)，*終來(lái)解答實(shí)驗(yàn)的目的是哪三個(gè)方面。
我們?yōu)槟淼倪@套實(shí)驗(yàn)過(guò)程簡(jiǎn)單明了，只需要十個(gè)步驟就可以完成。
1、事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。
2、從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管（100 μl）感受態(tài)菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10 min。
3、加入5 μl 連接好的質(zhì)粒混合液（DNA含量不超過(guò)100 ng），輕輕震蕩后放置冰上20 min。
4、輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2 min進(jìn)行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5 min。
5、在超凈工作臺(tái)中向上述各管中分別加入500 μl LB培養(yǎng)基（不含抗菌素）輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1 h。
6、在超凈工作臺(tái)中取上述轉(zhuǎn)化混合液100-300 μl，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養(yǎng)皿中，用酒精燈燒過(guò)的玻璃涂布棒涂布均勻。
7、如果載體和宿主菌適合藍(lán)白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精燈燒過(guò)的玻璃涂布棒涂布均勻。
8、在涂好的培養(yǎng)皿上做上標(biāo)記，先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30~60 min 直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后，再倒置過(guò)來(lái)放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過(guò)夜。
9、在被細(xì)菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
10、觀察平板上長(zhǎng)出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開(kāi)為好。注意白色菌斑。
上海恒遠(yuǎn)感謝您使用來(lái)時(shí)間觀看了本篇文章，如果您有什么產(chǎn)品需要以及技術(shù)問(wèn)題解惑都是可以來(lái)電給我公司詢問(wèn)的。旁余之話我們不多說(shuō)，這里給出了一個(gè)小提醒，在操作時(shí)，玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻，待其冷卻后再涂。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也要細(xì)心哦！
已經(jīng)快要是文章的結(jié)尾了，您還記得我們給出的問(wèn)題嗎？在問(wèn)題中已經(jīng)表明實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑槿齻�(gè)方面，我們*后就來(lái)看看究竟是哪三個(gè)方面。
1、用于分子生物學(xué)其他研究。
2、將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌受體細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制，增殖和表達(dá)，以獲得目的基因。
3、驗(yàn)證大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞效果。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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