自殺質(zhì)粒構(gòu)建的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化含有自殺質(zhì)粒的大腸桿菌，是否會有質(zhì)粒的相容性問題？

我從別處要到一株含有自殺質(zhì)粒的大腸桿菌，現(xiàn)在提取了自殺質(zhì)粒后和目的片段連接，連接后的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化含有自殺質(zhì)粒的大腸桿菌，是否會有質(zhì)粒的相容性，如果有，我連接后的質(zhì)粒丟失，還是根本就轉(zhuǎn)不進去？

沒有必要再轉(zhuǎn)到含有自殺質(zhì)粒的細菌中了。你構(gòu)建的含有同源片段的重組質(zhì)粒本來就具有自殺質(zhì)粒的功能，轉(zhuǎn)到?jīng)]有自殺載體的細菌中，其同樣能夠進行敲除或失活目的基因。另外，如果你有其他特殊目的，實在要轉(zhuǎn)到含有自殺載體的細菌里的話，那你可在你重建的質(zhì)粒上添加一個不同的抗性基因，這樣就可以通過添加抗生素防止質(zhì)粒丟失了。還有質(zhì)粒的不相容性是一個緩慢的過程，一般需要幾代或幾十代或更長的細菌繁殖周期，你做自殺載體的話肯定不需要他長時間（一般發(fā)酵生產(chǎn)需要）存留的，只要目的基因整合到基因組上面就可以了。

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