細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù),還是其中的生物克隆技術(shù)來說,細(xì)胞培養(yǎng)都是一個必不可少的過程,細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或少分化的多細(xì)胞,這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié),而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù),通過細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞,又可以借此研究細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長增殖等。
想要培養(yǎng)細(xì)胞可不是一件容易的事,一個步驟做錯,就會功虧一簣,恒遠(yuǎn)生物技術(shù)人員就給大家著重講解一下,細(xì)胞培養(yǎng)如何預(yù)防污染。
1.細(xì)胞污染的預(yù)防
①實驗用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒,各種溶液滅菌要仔細(xì),并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。
②操作過程防止污染。
③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進入細(xì)胞間。
④實驗開始需要確定戴的手套沒有問題,只要接觸過生物安全柜之外的物品,必須及時對手套進行消毒。
⑤進入細(xì)胞培養(yǎng)間后關(guān)好門,坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風(fēng)簾。工作開始要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴(yán)格檢查所用的器材、溶液和細(xì)胞,不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi),更不能隨便使用,以免造成大規(guī)模污染。
⑥細(xì)胞操作時動作要輕,必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口,并將瓶口放在火焰周圍簡單轉(zhuǎn)動燒灼,注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。
⑦實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低,盡量減少談話,打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區(qū),以免造成不必要的污染。
⑧瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方,以避免瓶蓋被誤操作所污染。
⑨不要從敞開的容器口上方經(jīng)過,以避免衣服上掉落不明物體對細(xì)胞的污染。
⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管,切勿一根管子做到底。一旦發(fā)現(xiàn)接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應(yīng)及時收拾,保持實驗室清潔整齊,用75%酒精清潔臺面。
2.防止細(xì)胞交叉污染
①在進行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時,所用器具要嚴(yán)格區(qū)分,作上標(biāo)記便于辨別。按順序進行操作,一次只處理一種細(xì)胞,多種細(xì)胞多種操作一起進行時易發(fā)生t昆亂。
②在進行換液或傳代操作時,粘有細(xì)胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口,以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)基中污染其他細(xì)胞。
③所有細(xì)胞一旦購置,或從別處引入,或自己建立,必須及時保種凍存,一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)。
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